常用名

LFM-A13

英文名

LFM-A13

CAS号

244240-24-2

分子量

360.001

密度

1.9±0.1 g/cm3

沸点

487.9±45.0 °C at 760 mmHg

分子式

C11H8Br2N2O2

熔点

无资料

闪点

248.9±28.7 °C

体外研究

LFM-A13显着抑制BTK活性，IC50为6.2±0.3μg/ mL（= 17.2±0.8μM）。计算的BTK，JAK1，JAK3，IRK，EGFR和HCK的LFM-A13的Kis为1.4,110,148,31.6,166和214μM。 LFM-A13（200μM）显着增加ALL-1细胞对神经酰胺诱导的细胞凋亡的化学敏感性[1]。 LFM-A13（100μM）抑制Epo诱导的R10细胞中EpoR，Jak2，Btk，Stat5和Erk1 / 2的磷酸化。 LFM-A13（100μM）抑制Jak2，Tec和Btk的自磷酸化，而不是COS细胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 LFM-A13有效抑制Plx1，IC50为10μM;也抑制BRK，BMX，FYN，IC50分别为267,281,240和215μM[4]。

体内研究

LFM-A13（25,50和100mg / kg）对大鼠没有明显的毒性。 LFM-A13（50mg / kg，每周三次，ip）减弱小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生。 LFM-A13单独或与紫杉醇组合显示出对BMBB / c小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生率，平均肿瘤数量，平均肿瘤重量和大小的显着影响。 LFM-A13（50 mg / kg，每周三次，腹腔注射）显着降低PLK1，cyclin D1，CDK-4，P53和Bcl-2的表达，但增加小鼠p21，IκB，Bax和caspase 3的表达。 [3]。 LFM-A13（200 mg / kg）不会对大鼠造成血液学毒性。 LFM-A13（10或50mg / kg，ip）在乳腺癌的MMTV / Neu转基因小鼠模型中表现出剂量依赖性的抗肿瘤作用[4]。

激酶实验

将纯化的His6-Plx1（250ng）加入到含有1x激酶缓冲液（10mM Tris-HCl，pH7.5,10mM MgCl2和1mM TT），25μM冷ATP和1μCi的20μL反应混合物中[ γ-32P] ATP在不同浓度的LFM-A13存在下，范围为5μg/ mL（13.9μM）至100μg/ mL（278μM）。将反应混合物在室温下温育15-30分钟，并通过加入2×SDS-PAGE还原样品缓冲液终止自磷酸化。在冷ATP存在下进行平行实验。然后使用市售的抗Plk抗体对激酶反应进行免疫印迹。免疫印迹证实每个反应中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我们还检测了LFM-A13对Plx1对底物磷酸化的影响。简而言之，首先将250ng纯化的Plx1与不同浓度的LFM-A13在室温下孵育1小时。孵育1小时后，将含有反应混合物的试管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽（254-316）（200ng），激酶缓冲液和[γ-32P] ATP并激活反应允许在室温下进行15分钟。用抗Cdc25抗体的免疫印迹用于证实在每种反应混合物中存在等量的底物肽。在测定中使用抗Plk抗体，谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和ECL试剂盒的多克隆抗体。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定实验中使用增加浓度的[γ-32P] ATP和纯化的N-末端His6-标记的重组人PLK3，残基19-301，在Sf21昆虫细胞中由杆状病毒表达来检测。简言之，在25μL的最终反应体积中，将PLK3（h）（5-10mU）与8mM MOPS，pH 7.0,0.2mM EDTA，2mg / mL酪蛋白，10mM乙酸镁和[γ]一起温育。 -32P-ATP]（比活度约为500cpm / pmol，根据需要浓缩）。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液终止反应。然后将10微升反应物点在P30滤垫上，在75mM磷酸中洗涤3次，每次5分钟，在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化强度（1 / v）与抑制剂（i）的浓度（即LFM-A13）的倒数图计算。从这个Dixon图中，Ki表示EI复合体的解离常数，它由线性交点确定[4]。