参考资讯|152095-12-0|Dp44mT技术资料

常用名

2-(二-2-吡啶基亚甲基)-N,N-二甲基肼基硫代甲酰胺

英文名

Dp44mT

CAS号

152095-12-0

分子量

285.367

密度

1.2±0.1 g/cm3

沸点

438.4±43.0 °C at 760 mmHg

分子式

C14H15N5S

熔点

无资料

闪点

218.9±28.2 °C

体外研究

Dp44mT对乳腺癌细胞具有细胞毒性，至少部分是由于top2α的选择性抑制。与健康乳腺上皮细胞（MCF-12A）相比，Dp44mT单独诱导乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的选择性细胞杀伤。它诱导G1细胞周期停滞并减少纳摩尔浓度下的癌细胞克隆形成。 Dp44mT，但不是铁螯合剂desferal，诱导DNA双链断裂，定量为在MDA-MB-231细胞中诱导的S139磷酸化组蛋白病灶（γ-H2AX）和彗尾。在低浓度的Dp44mT存在下，阿霉素诱导的细胞毒性和DNA损伤都显着增强。通过体外DNA切割测定和细胞拓扑异构酶-DNA复合物形成测量，螯合剂引起DNA拓扑异构酶IIα（top2α）的选择性中毒[1]。 Dp44mT通过铜结合靶向溶酶体完整性。铜结合对于Dp44mT的强效抗肿瘤活性至关重要，因为与无毒铜螯合剂的共孵育显着减弱其细胞毒性[2]。

激酶实验

对于DNA拓扑异构酶IIα测定，来自pBluescript SK（ - ）噬菌粒DNA或单链寡核苷酸的161-bp片段用[32P] ATP和T4多核苷酸激酶进行5'-末端标记。随后通过Mini Quick Spin DNA柱（对于pSK片段）或Oligo柱（对于寡核苷酸）离心标记混合物以除去未掺入的标记。通过将反应混合物加热至95℃并在10mM Tris-HCl（pH7.8），100mM NaCl和1mM EDTA中冷却至室温，完成对寡核苷酸互补链的退火。在存在或不存在Dp44mT的情况下，将DNA底物（10pmol /反应）与500ng top2a或top2h在25℃下在10μL反应缓冲液中孵育指定的时间。加入SDS（终浓度0.5％）终止反应。样品在16％（对于pSK DNA）或20％（对于寡核苷酸）变性聚丙烯酰胺凝胶（7M尿素）上分离。使用PhosphorImager [1]进行成像和定量。