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你知道生产L-酪氨酸的方法吗?

发表时间:2023-06-28

微生物发酵法通常以甘油、葡萄糖等生物质碳源为原料,通过优良的微生物菌种在合适的条件下发酵来累积L-酪氨酸。早期研究常通过人工诱变来选育L-酪氨酸高产菌株,如筛选L-苯丙氨酸或L-色氨酸缺陷或抗反馈抑制的菌株等。然而大多数微生物积累芳香氨基酸的能力很低,且其代谢途径的调控机制十分复杂,传统的诱变育种方法往往只能对局部代谢途径或者关键酶作用,难以对全局的L-酪氨酸代谢流造成很大的影响。


近年来随着代谢工程和各种先进生物技术的迅猛发展,重新合理设计微生物的代谢途径来更好地实现L-酪氨酸的发酵生产逐渐成为研究热点。研究较多的L-酪氨酸代谢工程菌主要有大肠杆菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等。其中以大肠杆菌和谷氨酸帮杆菌中 L-酪氨酸的合成途径和调控机制研究的最多并阐释的最为清楚。

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L-酪氨酸生物合成途径属于芳香族氨基酸合成途径。其合成的前体物4-磷酸赤藓糖(Erythrose-4-phosphate, E4P)和磷酸烯醇式丙酮酸(Phosphoenol pyruvate,PEP)在DAHP合成酶(DS)的催化下缩合生成3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸(DAHP),该反应也是L-酪氨酸生物合成途径的第一个限速步骤。在大肠杆菌中DAHP合成酶包含AroG、AroF和AroH三个同工酶,其表达和酶活分别受产物L-苯丙氨酸、L-酪氨酸和L-色氨酸的反馈阻遏和反馈抑制。


从DAHP到分支酸的7步反应对于所有芳香氨基酸是共同途径。而分支酸是芳香族氨基酸合成途径的分支点,一个分支途径用于合成L-色氨酸,另一部分则在分支酸变位酶(Chorism mutase,CM)和预苯酸脱水酶(Prephenatedehydratase,PD)双功能酶TyrA的作用下生成对羟基苯丙酮酸(4HPP),后者通过与L-谷氨酸的转氨作用生成L-酪氨酸,而TyrA的表达和酶活同样受到产物L-酪氨酸的反馈阻遏和反馈抑制。
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