香豆素(Coumarin)具有苯并吡喃酮结构,它是一大类存在于植物界中的香豆素类化合物的母核。荧光是香豆素一个特有的物理性质,在紫外光下,常显蓝色荧光。在7-位引入推电子基团(比如氨基)后,可使荧光加强;在3- or 4-位引入拉电子基团(比如羧酸基)后也能增强荧光。香豆素本身荧光较弱,引入这些基团后增加了分子内电荷转移(intranolecular charge transfer)机率,荧光增强,即使在可见光下,也能观察到荧光。另外,在3- or 4-位引入官能团也可以控制香豆素荧光的激发波长和发射波长,调节荧光颜色,比如,Coumarin 6和Coumarin 545可以发绿色荧光。
香豆素类荧光染料分子量很小,可紫外激发,一般发蓝色荧光(emission range ~410 to 470 nm),常常作为多色荧光靶标实验中蓝光染料。由于价格便宜,个头小,香豆素类染料常常用于标记酶底物,从而可在细胞中,溶液中检测酶活性。
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AMCA,有时也叫7-AMCA,是7-Amino-4-methylcoumarin acetate的缩写,是一种常用的发蓝色荧光的香豆素类染料。AMCA的优点包括分子量小,结构简单,斯托克斯位移(Stokes shift)大等。AMCA常常用于多色荧光标记实验,可以和很多染料合用,因为它的荧光发射谱和常用绿色荧光染料及更长波长的染料重叠小,干扰很少。另外需要指出的是AMCA的荧光不是很强(蓝色荧光通性),而且较易光漂白,不适合检查丰度很低的靶标。如需水溶性AMCA,可选择磺化AMCA,即AF350。