一、概述
基质胶(Basement Membrane Matrix)是从富含胞外基质蛋白的EHS(Engelbreth-Holm-Swarm)小鼠肿瘤中提取的基底膜基质。其主要成分为层粘连蛋白,还含有IV型胶原、硫酸肝素糖蛋白、巢蛋白、各种生长因子、组织纤溶酶原激活物和微量的基质金属蛋白酶等。这种基质胶广泛用于血管生成、肿瘤细胞迁移、体内肿瘤模型的建立、3D肿瘤细胞模型和类器官等研究领域。本文重点介绍不含乳酸脱氢酶增高病毒(Lactate dehydrogenase elevating virus,LDEV)的基质胶及其应用。
基质胶的独特优势
丰富的生物活性成分:基质胶含有多种生物活性成分,如层粘连蛋白、胶原蛋白和硫酸乙酰肝素,能够模拟细胞外基质环境,支持细胞的黏附、增殖和分化。
促进细胞生长与分化:基质胶能够为细胞提供三维生长环境,促进细胞的生长和分化,尤其适用于干细胞和肿瘤细胞的培养。
良好的生物相容性:基质胶具有良好的生物相容性,适用于多种细胞类型,包括上皮细胞、内皮细胞和神经细胞。
科研应用
细胞培养:基质胶广泛用于细胞培养,特别是干细胞和肿瘤细胞的三维培养。它能够模拟体内细胞外基质环境,支持细胞的黏附、增殖和分化。
组织工程:基质胶在组织工程中展现出显著的应用价值。它可以用于制备三维细胞支架,支持组织的再生和修复。例如,在肝细胞和肾小管上皮细胞的培养中,基质胶能够显著提高细胞的极性和功能。
肿瘤研究:基质胶在肿瘤研究中具有重要应用。它可以用于研究肿瘤细胞的侵袭和迁移,帮助揭示肿瘤的转移机制。
药物筛选:基质胶能够提供一个接近体内的细胞生长环境,用于药物筛选和毒性测试,提高实验结果的可靠性和相关性。
二、产品特性
不含LDEV:经免疫方法及PCR方法检测,基质胶中不含有LDEV或其他小鼠和肿瘤来源的病毒,确保实验的安全性和可靠性。
不含酚红:部分基质胶产品不含酚红,适用于荧光检测或显色反应等分析,避免酚红对实验结果的干扰。
成分丰富:含有多种细胞外基质成分和生长因子,为细胞生长和分化提供必要的支持。
三、应用场景
常规的细胞实验:如2D、3D细胞培养,细胞生长、分化、形态研究,细胞化学功能,血管生成、细胞迁移/侵袭,细胞基因/蛋白表达等。
干细胞培养:如人胚胎干细胞(hESC)、诱导多能性干细胞(iPSC)的培养,提供无滋养层培养所需的可重复性和一致性。
类器官研究:为类器官生长提供必要的生长因子、蛋白质和所需的基质结构,常用于类器官的生长和分化研究。
四、使用方法
解冻与分装
将基质胶小瓶置于冰中并在4℃冰箱避光过夜融化,蛋白浓度高时可能需要更多时间。请勿放置于冰箱门上或者经常需开启的冰箱。
使用预冷的移液管轻柔地吸取基质胶或涡旋小瓶以确保其分散均匀,然后根据后续实验所需量进行分装,置于≤-20℃避光保存。
包被方法
薄胶法:形成的凝胶厚约0.5mm,用于细胞贴壁和增殖。将基质胶置于冰中并在4℃融化,使用预冷的移液管或吸头混合基质胶至均匀状态。将培养板置于冰上,按照50μL/cm2向培养板/皿的生长表面加入基质胶。将培养板/皿置于37℃孵育30min以固化基质胶。
厚胶法:形成的凝胶厚约1-2mm,用于3D细胞培养。将基质胶置于冰中并在4℃融化,使用预冷的移液管或吸头混合基质胶至均匀状态。将培养板置于冰上,按照150-200μL/cm2向培养板/皿的生长表面加入与细胞混合后的基质胶。将培养板置于37℃孵育30min以固化基质胶。
薄层包被法:使用较低的基质胶浓度使仅形成混合的蛋白包被层,不形成凝胶。将基质胶置于冰中并在4℃融化,使用预冷的移液管混合基质胶至均匀状态。使用不含血清的培养液或PBS将基质胶稀释到需要的浓度。
五、注意事项
初次解冻后请适当分装,避免反复冻融。在保存过程中,产品需维持在冻结状态。由于无霜冰箱的自动除霜功能可能影响冰箱内的温度,因此不建议将产品储存在无霜冰箱中。
解冻的基质胶避光放置于4℃冰箱或冰上可以保持30天左右的液态化,但仍建议解冻后就进行分装或用于相关实验。
使用本产品时应注意无菌操作,避免污染。解冻后,请将产品放置在无菌的区域,在顶部喷洒70%乙醇消毒并风干。
实验过程中拿取基质胶的时候需注意手不可接触基质胶部位的瓶身,避免体温引起的基质胶凝固,应用手指持住装有基质胶的瓶子上方。
实验完毕后,剩余的基质胶不可留待下次使用。
产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
六、存储条件
基质胶应在-20℃避光保存,有效期为两年。
本文引用:https://www.perfemiker.cn
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