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产品描述

General description

DIG-High Prime has enzyme and nucleotide mixture for rapid random-primed labeling of DNA with Digoxigenin-11-dUTP. In this method, the complementary DNA strand of denatured DNA is synthesized by Klenow polymerase using the 3′-OH termini of the random oligonucleotides as primers. DIG-labeled probes are generated at high yield within one hour or after overnight incubation.

We are committed to bringing you Greener Alternative Products, which adhere to one or more of The 12 Principles of Greener Chemistry. This product is designed as a safer chemical.? The DIG System was established as a sensitive and cost-effective alternative to radioactivity for the labeling and detection of nucleic acids. There are many available publications that prove the versatility of the DIG System, so use of radio-labeling is no longer the only option for labeling of DNA for hybridization.

Specificity

热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH8.0）和/或加热至 65℃ 10 分钟来终止反应。

Application

DIG-High Prime-labeled DNA probes has been used in a variety of hybridization techniques :
in Southern blots^[2]
in northern blots
in dot/slot blots
for screening of gene libraries
in?In situ?hybridizations^[1]
Due to highly specific and sensitive detection systems, DIG-labeled DNA probes can be used for single-copy gene detection in 1μg total human DNA. The use of the alkali-labile form of DIG-dUTP, in which the digoxigenin moiety is connected to the spacer arm via an alkali-labile ester bond, enables easier and more efficient stripping and reprobing of blots.

Features and Benefits

DIG-High Prime 保证有效标记：
标准反应中 DNA 含量范围为 10ng 至 3μg。
不同长度的 DNA，从小的限制性片段到 λ 或粘粒 DNA。
DNA，超螺旋或线性化。
低熔点琼脂糖中的 DNA。

标记效率：
用 1μg 模板进行的标准标记反应在 1 小时后产生 0.8μg 新合成的洋地黄毒苷标记的 DNA，在 + 37℃ 温育 20 小时后产生 2μg。

内容
5x 浓缩的随机引物混合物：1U/ μl Klenow 聚合酶，标记级，1mM dATP，1mM dCTP，1mM dGTP，0.65mM dTTP，0.35mM DIG-11-dUTP，在 50％（v/v）甘油中碱不稳定。

Quality

功能测试：
在 1μg 线性化 pBR 328 的标准测定中，1 小时后合成 0.8μg DIG 标记的 DNA，20 小时后合成 2.3μg。当该标记的 DNA 用于以 20ng/ml 的浓度杂交时，通过化学发光，用抗 DIG-碱性磷酸酶缀合物和 CSPD 在斑点印迹或 Southern 印迹上检测 0.03pg 同源 DNA。

Principle

根据随机引物标记技术，用 DIG-High Prime 产生 DIG 标记的 DNA 探针。DIG-High Prime 是一种专门开发的反应混合物，含有*-11-dUTP 和随机引物标记所需的所有试剂，包括 Klenow 酶，在优化的 5x 浓缩反应缓冲液（在 50% 甘油中）中预混合。

Preparation Note

反应混合物或杂交缓冲液中的 DIG 标记的探针在 -15 至 -25℃ 下可稳定储存超过 12 个月。如果在使用前新鲜变性，它们可以重复使用几次。

检测时间：80 分钟

样品材料
?至少 100bp 的 DNA 片段
线性化质粒，粘粒或 λDNA
超螺旋 DNA
或最小量的 DNA（10ng），例如从凝胶或熔融琼脂糖中分离的 DNA 限制片段

注意：为了获得*结果，模板 DNA 应该线性化，并且片段长度为 100bp，或更长。如果 DNA 模板 >5kb，在标记前使用 4bp 切口的限制性内切酶进行限制性消化。

Other Notes

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。