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产品描述

General description

用于生物素-16-UTP标记RNA的便捷核苷酸混合物。

Specificity

热灭活：添加2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0)以终止反应。

Application

生物素RNA标记混合物已用于通过生物素-16-UTP与SP6、T7和T3 RNA聚合酶体外转录的RNA标记。
生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术：
DNA印迹
RNA印迹
斑点印迹
菌落及菌斑清除
RNA酶保护试验
原位杂交
微阵列杂交
RNA pull down试验

Features and Benefits

组份
10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5

Quality

结合DIG RNA标记试剂盒进行了功能检测。

Principle

生物素标记的、确定长度的单链RNA探针通过体外转录产生。生物素-16-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中，转录条件如下所述。生物素RNA标记混合物专为Roche SP6、T7和T3 RNA聚合酶设计，随附优化的转录缓冲液。

Preparation Note

反应时间：135分钟

样本材料
线性质粒DNA
待转录的DNA被克隆到适当的转录载体的聚链子位点，该转录载体与聚链子相邻，包含SP6、T7或T3 RNA聚合酶的启动子。为合成′终止′转录本，质粒被限制性内切酶线性化。应使用产生5&8242;-突出端的限制性内切酶；避免使用3&# 8242;突出端。线性化模板DNA应采用酚氯仿萃取和乙醇沉淀法纯化，以避免RNase污染。对于′循环′转录，应使用环状质粒DNA。
PCR产物
含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段也可以作为转录模板。推荐在转录前通过凝胶电泳纯化正确的PCR片段。

标记效率
通过1μg线性模板DNA和RNA聚合酶进行标准标记反应，产生大约10μg全长生物素标记RNA。在斑点试验中，联用抗生物素-AP与化学发光底物CSPD可检测低至0.3pg的生物素标记RNA。

Other Notes

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。