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产品描述

General description

Genopure质粒大提试剂盒；使用说明

用于大规模（maxi）制备质粒DNA。

Application

Genopure质粒大提试剂盒可用于从细菌培养物中大量制备转染级质粒DNA（最多500μg质粒）。分离得到的质粒适用于大多数分子生物学应用：

转染
Southern印迹
测序
PCR/长片段PCR
限制性酶切消化
克隆

Features and Benefits

Genopure质粒大提试剂盒使用改良的碱性裂解法，可大量制备高纯度的质粒DNA。

使用即用型试剂，节省时间。
最多可纯化10个样品（10分钟手动操作/总共75分钟）。
可纯化所有大小和类型的质粒
甚至是BAC DNA，因为可以过滤粗裂解物以避免质粒剪切。
可并行处理多个样本
使用高速重力流动柱。
无需使用有害的有机化合物
如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。
所得质粒DNA的纯度高于
通过2×氯化铯梯度离心制备的质粒。

Components

悬浮缓冲液
RNase A
裂解缓冲液
中和缓冲液
平衡缓冲液
洗涤缓冲液
洗脱缓冲液
NucleoBond AX 500色谱柱
折叠式过滤器（直径240 mm）
密封圈

Quality

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试；根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示，在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用250μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时，回收率高于90％。通过从DH*细胞中分离pBS，确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的150ml培养物中，获得超过400μg的质粒DNA。

纯度（利用A₂₆₀/A₂₈₀比率进行检测）为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程，检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

Preparation Note

分离流程基于改良的碱性裂解法，可分为以下步骤：细菌被部分裂解，使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心，除去裂解物中的细胞碎片，并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上，使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 *，从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来，以除去盐并浓缩质粒。

Analysis Note

样品：
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：30至150mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：100至500mL细菌培养物
质粒大小：分离流程适用于所有大小的质粒。注意：较大构建体（高达100 kb）的裂解液应通过过滤而不是离心来净化，以避免剪切质粒。
所需时间：75分钟（包括过滤裂解液）
一般产量：
高拷贝数质粒：3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒：0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度：分离的质粒DNA不含其他细菌成分，包括RNA。

Other Notes

离子交换色谱

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。