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产品描述

General description

转录组逆转录酶；使用说明

一种重组逆转录酶，用于在热循环仪和实时PCR仪器上进行两步RT-PCR，以稳定转录*达14 kb的RNA片段。

在逆转录病毒中，如人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1），逆转录酶是核心酶。HIV-1 RT由两个亚单位66 kDa和51 kDa（p66和p5l组成）。^[1] 一种HERV-K家族的人类内源性逆转录病毒，可编码逆转录（RT）酶。^[

Application

Transcriptor Reverse Transcriptase is designed to transcribe RNA (mRNA, total RNA, viral RNA, and in vitro-transcribed RNA) from a variety of sources, using conventional thermal cyclers and real-time PCR instruments (e.g., the LightCycler^® Instruments) for the following applications:

Synthesis of first-strand cDNA for use in subsequent amplification reactions
RT-PCR of GC-rich RNA templates
Cy3, Cy5, DIG, biotin, and aminoallyl labeling during cDNA synthesis
Retrieving and cloning the 5′ and 3′ termini of mRNA by RACE
Generation of cDNA libraries with large inserts
Dideoxy DNA sequencing
RNA sequencing
3′-end labeling of DNA fragments
Generation of single-stranded probes for genomic footprints
In the reverse transcription of RNA from human Papillomavirus E6,^[3]  cortical and striatal tissues,^[10]  muscle biopsies of Becker muscular dystrophy samples^[5]  and miRNA stem-loop from oocytes^[6]  and human cerebral microvascular endothelial cells (hCMVECs)^[7]

Biochem/physiol Actions

人类免疫缺陷病毒1型逆转录酶（HIV-1 RT）对于将单链病毒RNA催化转化为整合到宿主细胞染色体中的双链线性DNA至关重要。^[1]

Features and Benefits

实现两步RT-PCR的高度灵敏度。
转录器逆转录酶用于常规热循环仪和实时PCR仪器（例如，LightCycler^®仪器）。
获取更多全长转录本，*14 kb。
可以生成带有大插入片段的cDNA文库。
反向转录困难的模板。
该酶在高温下工作良好，从而克服了RNA二级结构（如富含GC的RNA模板），有利于优化反应条件。
高效标记cDNA。
在cDNA合成过程中纳入Cy3-、Cy5-、DIG-、生物素或氨基烯丙基标记的核苷酸。

Components

转录组逆转录酶，在储存缓冲液中
转录组RT缓冲液，5倍浓缩

Quality

每批逆转录酶都在逆转录聚合酶链反应中进行常规功能测试：

用传统的热循环仪检测来自人类肌营养不良蛋白基因的10kb片段，从人类骨骼肌总RNA开始
用LightCycler^®仪器检测5 x 10²至5 x 10⁶副本的体外-转录人群PBGD RNA。结果以固定交叉点和固定荧光强度来定义。

Preparation Note

体积活度：20 U/μl。
较长、罕见或困难的RNA靶的转录
逆转录酶推荐用于以下方面的RT-PCR：

长靶，因为它可以转录高达14 kb的RNA模板
罕见靶，因为它具有高度灵敏度
富含GC的靶，因为它可以在高温（高达+65^oC）条件下工作，以消除与大量二级结构相关的问题

许多应用的标记
转录组逆转录酶也被推荐用于制备标记的cDNA，因为它接受多种修饰的核苷酸（包括Cy3、Cy5、DIG、生物素或氨基烯丙基标记的dNTP）。
反应要求
转录者接受ssRNA和ssDNA模板，并要求转录引物。

Other Notes

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。